EXAMES BACTERIOSCOPICO
Observação microscopica de laminas com esfregaço corados pelo método de Gram.
Princípio: O método de Gram permite classificar as bactérias em dois grandes grupos: as que retêm Violeta de genciana ( Gram-positiva ) e as que não retém o violeta genciana (Gram-negativa). Além do mais, é útil para determinar a forma ( cocos e bacilos ), e o arranjo das células após a divisão celular (em forma de cacho, cadeias, sarcina etc., ). As células bacterianas são caracterizadas morfologicamente:
- Comportamento tintorial: Gram-positiva ou Gram-negativa
- Forma: cocos (esféricos), bacilos (cilíndricos) e espirilos (espiralados)
- Arranjo: Disposição das células entre si. Os cocos podem estar isolados, aos pares (diplococos), agrupados em cachos (estafilococos), em cadeia (estreptococos). Os bacilos e espirilos se apresentam em geral como células isoladas porém, ocasionalmente, pode-se observar bacilos aos pares (diplobacilos) ou em cadeia ( estreptobacilos ).
Quanto ao tamanho, as células bacterianas são sempre de dimensões microscópicas, o diâmetro da maioria delas varia de
Material: Reagentes de Gram: sol. cristal-violeta 2%; sol. aquosa de iodo (Lugol); mistura álcool-acetona; sol. alcoólica de safranina[1], Lâminas: Suporte para lâminas; alça de platina; Bico de Bunsen; Microscópio; Óleo de Imersão
Métodos:
- Preparar o esfregaço e fixar ao calor
- Cobrir a área do esfregaço com a solução de cristal-violeta por cerca de 1min.;
- Lavar com água corrente e escorrer o excesso de água;
- Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo durante cerca de 1 minuto;
- Descorar a lâmina com a mistura álcool-acetona, até que o solvente escorra incolor;
- Cobrir o esfregaço com a solução de safranina1 por cerca de 30 segundos;
- Lavar com água corrente;
- Deixar secar ao ar .
REAGENTES PARA COLORAÇÃO DE GRAM
Cristal Violeta Solução A Cristal-violeta.......... 2g Álcool etílico ............ 20 ml Solução B Oxalato de amônio ...... 0,8g Água destilada ............ 80 ml MISTURA A + B |
Contracorante
Solução estoque: Safranina
Solução uso: Diluir sol. estoque 1/10 |
Lugol
Iodo ...........................1g Iodeto de potássio ...... 2g água destilada ...... 300ml
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Resultados: As bactérias Gram-positivas retêm o cristal-violeta e se apresentam com coloração violeta, enquanto as Gram-negativas são descoradas pelo álcool-acetona, sendo, portanto, coradas pela safranina e se apresentam róseas.