MORFOLOGIA DOS FUNGOS FILAMENTOSOSOS
Objetivos: Observar a morfologia das estruturas de alguns fungos; comparar morfologicamente duas espécies de fungos das classes Phycomycetes e Ascomycetes
Princípio: Os fungos são organismos eucarióticos, heterotróficos, aclorofilados, imóveis, respiração aeróbica e comumente filamentosos. Crescem em meio de cultura com pH de 2 a 9. Produz esporos de forma sexuada e assexuadamente. Os esporos sexuados e as estruturas que os envolvem, são geralmente distinguíveis morfologicamente dos esporos assexuados, os quais são formados por simples diferenciação do talo em desenvolvimento. O talo de um fungo é formado de filamentos tubulares microscópicos – hifas, que em seu conjunto, formam o micélio.
Material: 3 placas contendo meio de cultura ( Sabouraud, BDA ou ágar Micosel); Tubos com cultura de Rhizopus, Penicillium e Aspergilus, alça de platina, lâmina, lamínula, azul de metileno, microscópio
Métodos:
- Inocular uma placa com Rhizopus, outra com Penicillium e outra com Aspergilus, colocando uma alçada no centro da placa (Não espalhar);
- Incubar a temperatura ambiente ou a 28ºC por 48 horas[1]
- Observar e anotar as características macroscópicas das colônias
- Com uma alça de platina retirar um fragmento da colônia, colocar sobre uma lâmina, pingar uma gota de corante (azul de metileno, azul de algodão ou verde malaquita, etc., ), cobrir com uma lamínula e observar no microscópio em lente de 40X
Resultados: Anotar as características macroscópicas e microscópicas das colônias:
Características macroscópicas: extensão do crescimento, o tipo de pigmentação dos esporos ou micélio, o tamanho das colônias, etc.
Características microscópicas: tipos de hifas (septadas ou não septadas), presença de esporos, corpo de frutificação (estrutura formadora de esporos) , disposição (desenho), etc.,
[1] Não inverter as placas, como se faz na incubação de bactérias
15. TÉCNICA DE MICROCULTIVO PARA FUNGOS
Objetivos: Observação das características morfológicas das hifas e corpos de frutificação dos fungos, utilizados como critério de identificação
Princípio: O microcultivo se fundamenta na cultura do fungo em pequenos pedaço de meio de cultura, entre lâmina e lamínula, onde o crescimento do fungo se espande e fixa na porção inferior da lamínula, que quando retirada com cuidado mantém as estruturas que formam esporos (corpo de frutificação), intacta, o que facilita melhor identificar as características dos fungos
Material: placa contendo ágar sabouraud, placa de Petri, lâmina, lamínula, chumaço de algodão hidrófilo, papel de embrulho, estilete ou alça de platina estéril, Inoculo de fungo (Rhizopus, Penicillium e Aspergilus), pipetas, gota de azul de metileno, microscópio.
Métodos:
- Colocar dentro de uma placa de Petri, uma lâmina, uma lamínula e um chumaço de algodão hidrófilo, acondicionar em papel de embrulho e esterilizar por autoclavação;
- Com auxílio de um estilete ou alça de platina estéril, cortar o ágar Sabouraud em pedaço quadrados de ±15mm e depositar sobre a lâmina que está dentro da placa;
- Inocular o fungo (ou material biológico) nos 4 lados do pedaço do ágar e cobrir com a lamínula;
- Adicionar cerca de 2ml de água estéril ao chumaço de algodão dentro da placa[1] e incubar a placa a 28ºC por 24 a 72 horas
- Após o crescimento do fungo, retirar cuidadosamente a lamínula e colocar sobre uma gota de azul de metileno depositada no centro de uma lâmina.
- Observar ao microscópio em lente de 40X
Resultados: Observar as estruturas que formam os esporos, bem como a disposição das hifas (desenhar e comparar com o manual )