11.CULTURA DE URINA (UROCULTURA)
Objetivo: A cultura de urina ou urocultura, tem como objetivo diagnosticar uma possível infecção do trato urinário (ITU).
Princípio: A urocultura é o isolamento, identificação e quantificação de bactérias na urina, que indica uma infecção do trato urinário (ITU)
Material: Ágar Cled ou ágar Brolacin, pipetas de 1ml e de 10ml, tubos contendo 4,5ml de salina estéril, lâminas, lamínulas, bateria de Gram, centrífuga, tubos de centrífuga, microscópio
Método:
Exame microscópico: O exame microscópico é feito com dois objetivos:
a) para a verificação de piúria;
- Transferir 10ml de urina para um tubo e centrifugar por 5min. a 2000 rpm;
- Desprezar o sobrenadante e examinar o sedimento entre lâmina e lamínula em objetiva de 40 X, determinando o nº de leucócitos por campo (eritrócitos, cristais, cilindros, ..)
b) para análise bacterioscópica:
- Com o sedimento da urina centrifugada, fazer um esfregaço na lâmina, fixar e corar pelo método de Gram
- Observar a flora Gram-positiva e ou Gram-negativa, estimar a população bacteriana, bem como a presença de leucócitos mono e polimorfonucleares.
Exame quantitativo: Consiste em fazer uma prévia diluição da urina e colocar em uma placa de Petri vazia estéreis e depois derramar o meio sobre a amostra e agitar para homogeneizar a amostra diluída com o meio de cultura. Técnica:
Ä Enumerar 4 tubos contendo 4,5ml de salina estéril (10-1 , 10-2 ,10-3 e 10-4 );
Ä Adicionar assepticamente, 0,5ml da urina no primeiro tubo (10-1), homogeneizar e transferir 0,5ml da mistura para o segundo tubo (10-2); homogeneizar e transferir 0,5ml da mistura para o terceiro tubo (10-3); homogeneizar e transferir 0,5ml da mistura para o quarto tubo (10-4);
Ä Enumerar 2 placas estéreis vazias (10-3 e 10-4 )
Ä Colocar 1ml da mistura do tubo (10-3) na placa (10-3); e 1ml da mistura do tubo (10-4) na placa (10-4)
Ä Fundir 10 ml de ágar Cled e refriar a 65ºC
Ä Derramar o ágar Cled fundido dentro das placas (10-3) e (10-4) e aplicar movimentos suaveis na placa para misturar a amostra com o meio;
Ä Esperar o meio solidificar novamente e incubar as placas a 37ºC por 24 a 48 horas
Ä Fazer a contagem das colônias nas placas e determinar o nº de colonias/ml da urina, multiplicando o número de colônias encontrado pelo fator de diluição (10-3 ou 10-4)
obs: A placa utilizada para contagem é aquela em que ocorrer crescimento entre 100 a 300 colônias.
Ä Com as colônias isoladas, proceder a identificação do germe
Resultados:
Exame microscópico: a contagem de leucócitos acima de 12 por campo indica um provável processo infeccioso; A bacteriocopia após a coloração de Gram indica a presença de formas de cocos ou bacilos, Gram-positivos e ou Gram-negativos, havendo predominância de uma flora sobre a outra.
Exame quantitativo:
Os critérios quantitativos na interpretação da urocultura, foi estabelecido por KASS, E.H. (1956), que considera a contagem abaixo de 10.000 UFC/ml correspondente à microflora residente ou normal da uretra anterior; Contagem de 10.000 a 100.000 UFC/ml, equivale a um resultado duvidoso, devendo ser confirmado; e contagem acima de 100.000 UFC/ml indicativa de uma infecção do trato urinário (ITU).
Comentários:
Na urocultura observa-se diversas normas ou cuidados para que os resultados possam ter boa correlação com a clínica. A primeira delas é a coleta, que pode ser pelo método não invasivo ou pelo método invasivo, conforme a necessidade
No método não invasivo, o paciente deve ser orientado para colher a primeira urina da manhã ou no mínimo após retenção vesical de 2 a 4 horas. A urina deve ser colhida em recipiente estéril após rigorosa antissepsia (asseio) da genitália com água e sabão sem outro produto que deixem resíduos. Desprezar o jato inicial (10-15ml) e colher o jato médio (JM).
No método invasivo a urina poderá ser colhida por punção suprapúbica (PSP, adequada p/anaeróbios) ou através de cateteres. Esta metodologia não é muito recomendável porque pode introduzir germes na bexiga, além de não ser bem aceita pelos pacientes e alguns médicos.
Na abordagem do paciente com ITU o exame de urina objetiva determinar PIÚRIA e BACTERIÚRIA. A piúria é a presença de glóbulos brancos degenerados (piócitos) na urina acima de 10 piócitos por campo; enquanto a bacteriúria é a presença da flora bacteriana exacerbada na urina. Pode ser significativa ou assintomática;
Temos que considerar também outros termos como Pielonefrite (Infecção das partes mais altas do trato urinário, comprometendo os canais coletores e os rins), Cistite (Afecção das partes mais baixas e a bexiga tornando-se o “sítio alvo”, com possibilidade de complicações da próstata (protatite); Infecção crônica (Sempre que o diagnóstico revelar a presença do mesmo agente causal, por longos períodos, provocando recaídas, após o tratamento).
A contagem baixa pode estar associada à infecção nos seguintes casos: a) Síndrome Uretral Aguda ou Disúria c/ Piúria - Trabalhos publicados por STAMM, W.E. et al., 1980 e 1989 mostravam que 1/3 das mulheres com infecção do trato urinário baixo, apresentavam contagens de 102 a 104 UFC/ml[1] com sintomatologia de cistite associada a piúria. Em homens com disúria, o critério de bacteriúria significativa é acima de 103 UFC/ml de um único uropatógeno. Esta síndrome é causada por Enterobactérias e Staphylococcus saprophyticus; b)Paciente hiperhidratados ou que não consigam fazer retenção vesical (principalmente crianças), poderão apresentar baixas UFC/ml porém significativas quando analisadas em conjunto com a clínica; c) Indivíduos sob antibioticoterapia; d) pacientes com alguma obstrução das vias urinárias que impeça a eliminação das bactérias; e) Infecção por Gonococo, Chlamydias, M. tuberculosis, Micoplasmas e vírus provocam processos em que se apresenta piúria sem bacteriúria evidenciável. Nestes casos geralmente as culturas são negativas, pois os procedimentos de rotina de uma urocultura estão voltados para os uropatógenos mais frequentemente relacionados a esse tipo de infecção.
Microrganismos nas ITUs:
São provenientes primariamente dos organismos aeróbios da flora fecal. BACILOS GRAM-NEGATIVOS: Escherichia coli, Klebsiella (K.pneumoniae) - Enterobacter ( E. aerogenes), Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp. COCOS GRAM-POSITIVOS: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus faecalis (Enterococos )
QUESTÕES
- Em uma cultura de urina, constatou-se 148 colônias em placa de ágar-Cled onde foi semeado 0,5ml da urina diluída 1/1000. Qual a contagem de colônias/ml do microrganismo isolado nesta cultura?
- Quais as recomendações que o paciente do sexo feminino e do sexo masculino deve tomar para coletar a urina para realização de uma urocultura?
- Comente sobre a relação piúria e bacteriúria com as infecções do trato urinário (ITU)
- Quais os principais microrganismos envolvidos nas infecções do trato urinário?
- Em que circunstância um paciente com infecção apresenta contagem baixa de bactérias na urina ( bacteriuria)?
- Por que se faz necessário a diluição da urina para realização de uma urocultura?
- Em que circunstância é recomendada a semeadura por esgotamento do sedimento urinário?