Princípio: A coloração simples tem bases físico-químicas. A impregnação de uma célula por um corante pode ser entendida a partir de fenômenos como a capilaridade, osmose, adsorsão e absorção. Mas, é sobretudo pela compreensão de certas reações de corantes de organóides, inclusões e estruturas celulares que se firmam as bases desta metodologia. Desta forma é observada uma reação estequiométrica entre corantes e uma dada estrutura, por força da afinidade de suas cargas opostas. Normalmente o que é uma reação de dupla troca de cátions e anions, do tipo[1]:
(Microrganismos)- (Na+, K+, etc) + (cromóforos) ® (microrganismo)- (cromóforos) + + (Na+ K+, etc. ) + (Cl-, oxalato, etc)
Material: Material biológico[2] em suspensão, lâminas, lamínulas, microscópio, pipeta Pasteur (ou conta-gotas), corante (azul de metileno, verde malaquita, Giemsa, etc)
Método: Colocar uma gota do material biológico sobre a lâmina e mais uma gota de corante (azul de metileno), cobrir com lamínula e observar ao microscópio com lente de 40X.
PREPARAÇÃO FIXA: Fazer um esfregaço com o material biológico. Esperar secar. Fixar ao calor[3]. Cobrir o esfregaço com o corante. Esperar por 1 a 5 min. Lavar com água, secar o observar ao microscópico com objetiva de imersão.
Interpretação: Anotar as suas observações, tais como presença de células, afinidade pelo corante, forma e disposição dos microrganismos, etc.
Comentários:
Sob o ponto de vista químico, os corantes são substâncias orgânicas possuidoras de grupamentos cromóforos que podem conferir aos corpos celulares uma dada pigmentação. Os corantes são classificados em três grupos, de acordo com a carga do íon da porção corante da molécula. Assim, são corantes ácidos os que têm uma carga negativa; básicos os que tem cargas positivas e neutros os que são, portanto, eletricamente neutro.
Em bacteriologia, os corantes básicos são os mais empregados. Isto justifica-se pela presença de cargas elétricas, negativas, ao longo do corpo celular, o que demonstra a afinidade por este tipo de corantes.
Questões:
- Os meios de cultivo e a idade da colônia exercem alguma influência na morfologia de células em coloração simples?
- A coloração simples se presta a identificação de uma cultura mista de microrganismos? Que observações poderiam ser obtidas?
- Qual a aplicação da coloração simples no Diagnóstico Laboratorial de doenças infecciosas?
- Cite exemplos de Doenças Infecciosas e seu agente infecioso que são diagnosticados seguramente pela uma coloração simples?
- Cite alguns cuidados, a serem tomados para a execução satisfatória da coloração simples.
- Os procedimentos realizados estão de acordo com o protocolo. Comente as alterações ou adaptações realizadas
- Relacione os matérias listados neste protocolo que não foram utilizados e quais outros materiais utilizados. Será que houve alguma falha no procedimento pela falta ou substituição do material?
- Quais as dificuldades encontradas na realização dessa prática?
- Os procedimentos de biossegurança foram seguidos com rigor? Quais os possíveis riscos de acidente de trabalho que os alunos e o professor sofreram? Comente sobre as normas de biossegurança.
- Elabore 10 questões a respeito da prática ao seu professor, para melhor esclarecimento das suas dúvidas