Observação de Microrganismos

1. Quais as principais medidas de biossegurança a ser tomada na realização deste exame? Resp = Cuidado para não expor os líquidos biológicos (amostras) com a pele e mucosa, utilizar equipamentos de proteção individual, tais como luvas, mascaras, aventais, gorro, etc.,
2. Para que serve uma preparação em gota pendente? Ela oferece alguma indicação sobre a viabilidade de uma cultura. RESP = Serve para observar formas vivas de micro-organismos, tais como trofozoitos de protozoários e bactérias móveis
3. Citar alguns cuidados, a serem tomados para execução satisfatória do exame a fresco? Resp = Cuidado para não expor os líquidos biológicos (amostras) com a pele e mucosa, utilizar equipamentos de proteção individual, tais como luvas, mascaras, aventais, gorro, etc.,
4. Quais as limitações do exame a fresco? RESP= Não se observa detalhes das estruturas celulares
5. A coloração simples se presta a identificação de uma cultura mista de micro-organismos? Que observações poderiam ser obtidas? RESP= Na coloração simples observa-se apenas algumas formas e estruturas, não serve para identificar as bactérias, sendo necessárias outras informações
6. Qual a aplicação da coloração simples no Diagnóstico Laboratorial de doenças infecciosas? RESP= É utilizado no diagnóstico de doenças causadas por protozoários, tais como MALÁRIA, DOENÇAS DE CHAGAS, LEISHMANIOSE, e por fungos (micoses)
7. Cite exemplos de Doenças Infecciosas e seu agente infeccioso que são diagnosticados seguramente pela uma coloração simples? Resp =MALÁRIA (Plasmodium sp), DOENÇAS DE CHAGAS (Trypanosoma cruzi), LEISHMANIOSE (Leishmania donovani), e por fungos (Trichophyton, Epidermophyton e Microsporum).
8. Cite alguns cuidados, a serem tomados para a execução satisfatória da coloração simples. RESP = Seguir as normas de biossegurança.
9. A coloração de Gram possibilita caracterizar as bactérias quanto ao comportamento tintorial (Gram-positiva e Gram-negativa), morfologia (cocos, bacilos, espirilos) e arranjo (em cacho, em cadeias, aos pares). Qual o significado destas informações para a medicina? RESP = É importante porque auxilia no diagnóstico e tratamento das doenças infecciosas.
10. Um técnico de laboratório ao fazer a coloração de Gram, sempre esquece de descorar com álcool-acetona, como o biólogo pode constatar este erro laboratorial ao observar no microscópio uma amostra de Escherichia coli? RESP= As bactérias apresentam características morfotintorial distintas do padrão observado, como por exemplo, a Escherichia coli que é classicamente uma bactéria Gram-negativa (cor vermelha), neste caso apresenta-se de cor ROXO.
11. A coloração de Gram exerce alguma importância em diagnósticos clínicos de bactérias isoladas de infecções humanas e animais? Citar pelo menos um exemplo. Resp = SIM, Algumas bactérias, tais como a NEISSERIA, apresenta características peculiares. Assim o achado de diplococcus Gram-negativos, intra e extracelulares em secreções pode sugerir uma GONORRÉIA, no caso da secreção uretral, ou uma MENINGITIDE, no caso do material for um LIQUOR.
12. Sendo o Gram um método de coloração diferencial, como esta reação pode ser empregada para a verificação do estado de pureza de uma determinada cultura? RESP = A realização periódica do exame de uma cultura pura demonstra que todas as colônias apresentam a mesma característica morfotintorial.
13. Comente a frase: “Uma bactéria Gram-negativa pode tornar-se Gram-positiva, dependendo do tempo de incubação da cultura, mas o inverso não é verdadeiro”. RESP = A característica tintorial de Gram-negativa é devido a presença da membrana externa, que pode ser perdida em certas condições de cultivo desfavorável, fazendo com que a bactéria apresente característica de Gram-positiva (roxa), mas o contrário não é possível porque uma bactéria Gram-positiva jamais adquire a membrana externa, ou seja, uma vez, Gram-positiva, sempre Gram-positiva.
14. Considere as etapas da coloração de Gram: Etapa 1: Corar com sol. Cristal-violeta; Etapa 2: Descorar com alcool-acetona;  Etapa 3: contracorar com Fucsina.  Quatro acadêmicos de Enfermagem fizeram a coloração de Gram em um esfregaço de cultura mista contendo um germe Gram-negativo (E.coli) e Gram-positivo (S.aureus), e encontraram o seguinte resultado:

Discuta os resultados indicando em cada situação, as etapas que não foram executadas e qual o acadêmico que acertou o diagnóstico

15. Descreva os métodos de observação microscópica de bactérias (exame a fresco e coloração). RESP = Existem dois métodos gerais utilizados para preparar espécimes microbiológicas para observação de micro-organismos por meio do microscópico luminoso. Técnica entre lâmina e lamínula e gota pendente - utiliza uma suspensão de micro-organismos vivos em uma gota ou uma camada líquida. Estas preparações (a fresco) são especialmente úteis quando a estrutura de um micro-organismo pode ser distorcida pelo calor ou agentes químicos, ou quando o micro-organismo não se cora facilmente. Técnicas de Coloração - a camada fina do espécime é seca e corada, assim os micro-organismos ficam fixados à superfície e apresentam-se corados para facilitar a visualização. Usadas para mostrar as várias estruturas dos micro-organismos, para identificar e separar suas estruturas internas e para ajudar a identificar e separar micro-organismos similares. Coloração Simples - a coloração de micro-organismo com uma única solução de corante; ex: azul de metileno para leveduras, ou bolores. Coloração de Gram - neste processo, o esfregaço bacteriano é tratado com os reagentes na seguinte ordem: o corante púrpura cristal violeta, a solução de iodo (substância que fixa o corante no interior da célula), o álcool (remove o corante de certas bactérias) e o corante vermelho safranina.
16. Um técnico de laboratório ao fazer a coloração de Gram de um esfregaço, esquece de descorar com álcool-acetona, como manda a técnica. Assinale a opção correta referente à situação: Ä As bactérias Gram-negativas serão observadas de cor roxa (violeta); Ä As bactérias Gram-negativas serão observadas de cor vermelha (fucsina); ÄAs bactérias Gram-positivas serão observadas de cor vermelha (fucsina); ÄAs bactérias Gram-positivas ficarão incolor; ÄAs bactérias Gram-negativas ficarão incolor
17. Um biólogo ao fazer a coloração de Gram de um esfregaço, esquece de descorar com álcool-acetona. Desta forma, ao examinar uma cultura de Escherichia coli (bacilos) e Staphylococcus aureus (cocos), ele certamente vai observar: Ä bacilos vermelhos e cocos vermelho; Ä bacilos azul e cocos vermelho; Ä bacilos vermelhos e cocos azul; Ä bacilos roxo e cocos roxo; ÄTodas estão corretas
18. Uma aluna ao fazer a coloração de Gram de um esfregaço, esquece de descorar com álcool-acetona, como manda a técnica. Assinale a opção correta referente à situação: Ä As bactérias Gram-negativas serão observadas de cor roxa (violeta); ÄAs bactérias Gram-negativas serão observadas de cor vermelha (fucsina);ÄAs bactérias Gram-positivas serão observadas de cor vermelha (fucsina); ÄAs bactérias Gram-positivas ficarão incolor; ÄAs bactérias Gram-negativas ficarão incolor; Ä Todas estão corretas
19. A base da coloração de Gram é: Ä A parede celular de bactérias Gram-positivas atua como uma barreira à extração do complexo cristal-violeta-iodo pelo álcool; Ä A parede celular de bactérias Gram-negativas atuam como uma barreira à extração do complexo cristal-violeta-iodo pelo álcool; ÄA membrana citoplasmática atuam como uma barreira à extração do complexo cristal-violeta-iodo pelo álcool; Ä Não há formação do complexo cristal-violeta-iodo em bactérias Gram-positivas; Ä todas estão corretas.
20. O teste de intumescimento é preparado para identificação de bactérias capsuladas. È baseada em: ÄAbsorção de água pelo higroscópico polissacarídeo capsular; ÄAumento da visualização da cápsula após a adição de antissoro específico; Ä aumento da coloração da cápsula quando se adiciona azul de metileno; Ä coloração específico de polissacarídeo com Sudan Negro; Ä Aparecimento de cor vermelha no meio após adição do reagente de intumescimento; Ä todas estão corretas.
21. Os grânulos metacromáticos visualizados na técnica de coloração de Albert é um indicativo da presença de quais das seguintes bactérias: ÄCorynebacterium diphtheriae; Ä Staphylococcus aureus; Ä Streptococcus pyogenes; Ä Neisseria gonorrhaea; Ä Treponema palidum; ÄTodas estão corretas;