8. ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE ESTAFILOCOCOS
Objetivo: Demonstrar as características morfológicas e propriedades bioquímicas dos estafilococos
Princípio: Morfologicamente apresentam-se nos esfregaços corados pelo Gram em forma de “cachos de uva”, sendo esta uma característica peculiar que os diferenciam dos estreptococos.
Podem ser isoladas com relativa facilidade de coleções purulentas da nasofaringe, lesões de pele e aparelho genital.
Dentre as espécies de estafilococos, sem dúvida alguma o Staphylococcus aureus é potencialmente a espécie mais virulenta, onde, em ágar sangue, geralmente apresenta-se hemolítico.
São vários os métodos de diferenciação das espécies de estafilococos; entretanto, o teste da coagulase é o mais indicado e adequado para a caracterização do S. aureus, visto que somente esta espécie apresenta reação positiva, configurando portanto esta reação como prova da patogenicidade dos estafilococos.
As outras espécies de estafilococos, denominadas de coagulase-negativa, somente nas últimas décadas têm sido implicadas na etiologia de processos infecciosos. Entretanto, os métodos ordinários de identificação empregados na microbiologia são incapazes de detectar isoladamente as doze espécies coagulase-negativa, ficando restrito o diagnóstico presuntivo ás espécies S. epidermidis e S. saprophyticus.
Material: Placas de ágar-sangue, de Chapman-Stone e ágar DNAse, cultivadas S.aureus de um lado e S.epidermidis do outro lado; Lâmina de microscópio, bico de Bunsen, bateria de corante de Gram, tubinhos (120mm), 2 pipetas de 2ml, 2 tubos contendo 2ml de salina, água oxigenada a 3%, alça de platina, plasma de coelho, Solução de bromocresol, placa contendo ágar Mueller-Hinton, disco de novobiocina, ácido clorídrico 1N, pipeta Pasteur.
Método: Observar as placas com cultura bacteriana, anotar as características coloniais e realizar os seguintes testes:
- Coloração de Gram
- Prova da catalase:
- Prova da Coagulase:
- Fermentação do manitol:
- Tolerância ao NaCl
- Sensibilidade a novobiocina
Coloração de Gram
- Fazer esfregaços em lâminas e fixar pelo calor
- Cobrir a área do esfregaço com a solução de cristal-violeta por cerca de 1min.;
- Lavar com água corrente e escorrer o excesso de água;
- Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo durante cerca de 1 minuto;
- Descorar a lâmina com a mistura álcool-acetona, até que o solvente escorra incolor;
- Cobrir o esfregaço com a solução de safranina por cerca de 30 segundos;
- Lavar com água corrente;
- Deixar secar ao ar .
Os estafilococos são visualizados como cocos Gram-positivos (roxo) isolados e agrupados em forma de cachos de uva