CARBOIDRATOS (MEIOS PARA FERMENTADORES)
Meio Básico
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Peptona ..................... 10g Extrato de carne .......... 3g NaCl ............................. 5g Indicador de Andrade ... 10ml Água destilada .......... 1000ml
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MODO DE PREPARO Distribuir em volumes de 3ml em tubos 13 x 100mm, incluindo tubos de Durham, quando indicados. Esterilizar a120°C, por 15 minutos.
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A concentração dos carboidratos varia de 0,5 a 1,0%. Glicose, manitol, salicina, adonitol e inositol podem ser acrescentados antes da esterilização. O tempo de esterilização para o glicerol limita-se a 10 minutos. Dissacarídeos (lactose, sacarose, celobiose) e Carboidratos como arabinose, xilose e ramnose devem ser esterilizados por filtração ou esterilizados separadamente em soluções concentradas a 10% em água, a fim de evitar hidrólise ou caramelização, juntando-se após, assepticamente, aos tubos com o meio básico (0,3ml por tubos).
INDICADOR DE ANDRADE
Água destilada ............ 100mlFucsina ácida .............. 0,5g NaOH 1N .................... 16 ml |
Dissolver a fucsina em água e acrescentar o hidróxido de sódio. Se depois de várias horas a fucsina não estiver dissolvida, acrescentar 1 ou 2ml de hidróxido de sódio.
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Carboidratos
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Metabolismo fermentativo x oxidativo (Meio de Hugh & Leifson. 1953) |
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OF Basal medium (Difco) |
9,4 g |
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Água destilada |
1000ml |
Distribuir em frascos volumes de 100ml e esterilizar a 120°C, por 15 minutos. Esterilizar soluções de carboidratos na concentração de 10% em água. Os monossacaridios (glicose, xilose, levulose) ou alcoóis (manitol) podem ser esterilizados em autoclave. Os dissacarideos (maltose, lactose, sacarose) devem ser esterilizados por filtração. Juntar 10ml de cada solução para 100ml do meio, de modo a atingir a concentração de 1%. Distribuir em tubos de 13 x 100mm volumes de 3ml.
Semeiam-se 2 tubos. Em um deles o meio é coberto com camada de óleo mineral (vaselina líquida) de, pelo menos, 0,5cm de altura. O outro é deixado descoberto.
Assim são definidas as seguintes reações:
a) acidificação (viragem para amarelo) no tubo coberto com vaselina, bem como no tubo descoberto: fermentação.
b) acidificação próxima ou a partir da superficie do tubo descoberto e não-acidificação do tubo coberto: oxidação não-fermentativa.
c) ambos os tubos neutros ou tendentes a alcalino: assacarolíticos
Os tipos de metabolismo de carboidratos assim definidos (fermentativo, oxidativo, inativo) estendem-se aos outros carboidratos em definição.