Desoxirribonuclease (DNAse)
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“DNase Test Ágar” (Difco ou BBL) ......... 42,0g Água destilada ....................................... 1000ml |
Fundir e esterilizar a 120°C, 15 minutos. Distribuir em placas de Petri.
Inocular em pontos definidos, sem estriação. Após crescimento, revelar com solução de ácido Clorídrico 1N. Uma zona transparente em torno do crescimento, após opacificação do ácido nucléico residual pelo ácido clorídrico, indica um teste positivo.
Resultados:
Em ágar sangue as colônias de estafilococos apresentam-se com coloração branca ou amarelada, opacas, cremosas e convexas, sendo que algumas cepas bacterianas produzem beta-hemólise.
O primeiro passo para a identificação presuntiva das colônias de estafilococos consiste na confecção de um esfregaço e posterior coloração pelo método de Gram, onde este grupo bacteriano apresenta-se agrupado caracteristicamente na forma de “cachos de uva”.
Quando não se consegue a diferenciação entre estafilococos e estreptococos, é recomendável a utilização da prova da catalase.
A catalase não é produzida pelos estreptococos, e a prova, que pode ser realizada em lâmina ou em tubo, se positiva, caracteriza a presença dos estafilococos.
Após a caracterização de uma colônia como sendo estafilococo, o passo seguinte consiste em identificar se esta é ou não S. aureus. Como relatado anteriormente, a prova da coagulase é utilizada pela maioria dos laboratórios para a identificação presuntiva desta espécie.
As cepas bacterianas coagulase negativa identificadas pelos métodos ordinários, S. epidemidis e S. saprophyticus, têm sua diferenciação através da prova de sensibilidade à novobiocina sendo que a maior parte das cepas de S.saprophyticus é resistente a este antibiótico ao contrário do S. epidemidis que mostra-se sensível.
A fermentação do manitol e a prova da desoxiribonuclease já foram muito utilizadas na diferenciação das espécies de estafilococos, entretanto sua utilização atual encontra-se limitada.
Abaixo têm-se os resultados das provas de coagulase, manitol, DNAse e novobiocina para as três espécies clínicas de estafilococos de maior importância.