BACTERIOSCOPIA

EXAMES BACTERIOSCOPICO

Observação microscopica de laminas com esfregaço corados pelo método de Gram.

Princípio: O método de Gram permite classificar  as bactérias em dois grandes grupos: as que retêm Violeta de genciana ( Gram-positiva ) e as que não retém o violeta genciana (Gram-negativa). Além do mais, é útil para determinar a forma ( cocos e bacilos ), e o arranjo das células após a divisão celular (em forma de cacho, cadeias, sarcina  etc., ). As células bacterianas são caracterizadas morfologicamente:

• Comportamento tintorial: Gram-positiva ou Gram-negativa
• Forma: cocos (esféricos), bacilos (cilíndricos) e espirilos (espiralados)
• Arranjo: Disposição das células entre si. Os cocos podem estar isolados, aos pares (diplococos), agrupados em cachos (estafilococos), em cadeia (estreptococos). Os bacilos e espirilos se apresentam em geral como células isoladas porém,  ocasionalmente,   pode-se   observar   bacilos  aos  pares (diplobacilos)  ou  em cadeia ( estreptobacilos ).

                Quanto ao tamanho, as células bacterianas são sempre de dimensões microscópicas, o diâmetro da maioria delas varia de 0,2 a 1,5 mm e comprimento de 1 a 6 mm.

Material: Reagentes de Gram: sol. cristal-violeta 2%; sol. aquosa de iodo (Lugol); mistura álcool-acetona; sol. alcoólica  de safranina[1], Lâminas: Suporte para lâminas; alça de platina; Bico de Bunsen;  Microscópio; Óleo de Imersão

Métodos:

• Preparar o esfregaço e fixar ao calor
• Cobrir a área do esfregaço com a solução  de cristal-violeta  por cerca de 1min.;
• Lavar com água corrente e escorrer o excesso de água;
• Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo durante cerca de 1 minuto;
• Descorar a lâmina com a mistura álcool-acetona, até que o solvente escorra incolor;
• Cobrir o esfregaço com a solução de safranina¹ por cerca de 30 segundos;
• Lavar com água corrente;
• Deixar secar ao ar .

REAGENTES PARA COLORAÇÃO DE GRAM

 Resultados: As bactérias Gram-positivas retêm o cristal-violeta e se apresentam com coloração violeta, enquanto as Gram-negativas são descoradas pelo álcool-acetona, sendo, portanto, coradas pela safranina e se apresentam róseas.